色譜法的有關(guān)知識(shí)

       色譜法是生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)領(lǐng)域的重要分析手段，在藥物分析中有著極為重要的地位，各國(guó)藥典都收載了許多藥物的色譜分析方法?！吨腥A人民共和國(guó)藥典》2015年版也不例外：收載了上千個(gè)藥品用色譜法進(jìn)行純度檢查、定性鑒別或含量測(cè)定。

      色譜柱中固定不變的物質(zhì)是固定相，攜帶樣品向前流動(dòng)的是流動(dòng)相，色譜類(lèi)型較多，從不同角度可以有不同的分類(lèi)方法：

 色譜法分類(lèi)：

1、按流動(dòng)相和固定相所處狀態(tài)分類(lèi)：

     流動(dòng)相為氣體的稱(chēng)為氣相色譜，流動(dòng)相為液體的稱(chēng)為液相色譜。固定相為固體的可分為氣固色譜(GSC)或液固色譜（LSC），固定相為液體的有氣液色譜（GLC）或液液色譜（LLC）。

 2、按固定相的形態(tài)分類(lèi)：可分為柱色譜法、平面色譜法，如，紙色譜法、薄層色譜法等。

 3、按分離過(guò)程的機(jī)制分類(lèi)：可分為分配色譜法、吸附色譜法、離子交換色譜法和空間排阻色譜法等類(lèi)型，后兩者只存在于 液相色譜中。

       另外，還有其他分離機(jī)制的色譜方法，如，毛細(xì)管電泳法，根據(jù)組分的電泳速度差異而實(shí)現(xiàn)分離。

色譜流出曲線與有關(guān)概念

 （一）色譜流出曲線和色譜峰：

 1、色譜流出曲線：在色譜分析中,樣品流經(jīng)色譜柱和檢測(cè)器,所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線,稱(chēng)為色譜流出曲線(elution profile),又稱(chēng)色譜圖。

 2、基線：在操作條件下，沒(méi)有組分流出、僅有流動(dòng)相通過(guò)檢測(cè)器系統(tǒng)時(shí)所形成的流出曲線。穩(wěn)定的基線應(yīng)是一條平行于橫軸的直線?；€反映儀器（主要是檢測(cè)器）的噪聲隨時(shí)間的變化。

 3、色譜峰：流出曲線上的突起部分，正常的色譜峰為正態(tài)分布曲線，曲線有zui高點(diǎn)，以此點(diǎn)的橫坐標(biāo)為中心，曲線對(duì)稱(chēng)的向兩側(cè)快速、單調(diào)下降。

       一種組分的色譜峰可用峰高或峰面積（用于定量）、峰位（用保留值表示，用于定性）及峰寬（用于衡量柱效）說(shuō)明。

（二）保留值：

1、保留時(shí)間（retention time）:色譜圖橫軸上從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分的色譜峰頂點(diǎn)的時(shí)間間隔為該組分的保留時(shí)間。

 2、死時(shí)間：不被固定相保留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值時(shí)的時(shí)間間隔。

 3、調(diào)整保留時(shí)間：組分被固定相滯留的時(shí)間。

 4、保留體積：從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大時(shí)，所需通過(guò)色譜柱的流動(dòng)相體積，單位為mL。

 5、死體積：不被固定相保留的組分通過(guò)色譜柱所消耗的流動(dòng)相的體積。

 6、調(diào)整保留體積：保留體積減死體積。

 7、相對(duì)保留值：兩組分的調(diào)整保留值之比，也是色譜系統(tǒng)的選擇性指標(biāo)。

（三）色譜峰高和峰面積：

 1、峰高（peak height, h）：色譜峰頂點(diǎn)至基線的距離。

 2、峰面積（peak area, A）：色譜曲線與基線間包圍的面積。

（四）色譜峰區(qū)域?qū)挾龋?/span>

 1、標(biāo)準(zhǔn)差：正態(tài)色譜流出曲線上兩拐點(diǎn)間距離之半。

 2、半峰寬：峰高一半處的峰寬。

 3、峰寬：通過(guò)色譜峰兩拐點(diǎn)作切線在基線上所截得的距離。

（五）分離度：又稱(chēng)分辨率或分辨度，它是色譜圖中相鄰兩峰分離程度的量度。